概述

法醫(yī)DNA案件分析實驗室常常遇到一定比例的富有挑戰(zhàn)性的樣品，很難成功檢測。而且，近年來送檢進行DNA分析的樣品大大擴展，覆蓋更廣的案件類型，包括侵財案件和輕微犯罪案件。因此，現(xiàn)在法醫(yī)實驗室必須處理更多的樣品，而這些樣品往往被一種或多種復雜因素所困擾（例如微量DNA、降解、新的或不熟悉的PCR抑制劑、以上兩個或更多的因素）。所有這些頗具挑戰(zhàn)性的情況會顯著影響分析人員獲得可信DNA圖譜的能力。許多實驗室為了從困難樣品中獲得更好的結果，盡量優(yōu)化他們的工作流程。這些優(yōu)化的方法包括對樣品進行稀釋或純化，在反應中加更多的酶，或者進行毛細管電泳條件的優(yōu)化。成熟的磁珠提取方法的出現(xiàn)，比如PrepFiler?法醫(yī)DNA提取試劑盒，幫助提高了從法醫(yī)檢材中提取的DNA數(shù)量和質量，從而提高了下游結果的質量。盡管已經獲得了顯著進步，但實驗室還是需要更多的工具，來應對不斷擴張的復雜DNA樣本。AmpFlSTR? Identifiler? Plus PCR擴增試劑盒是特地為滿足法醫(yī)分析實驗室的需要而開發(fā)的。Identifiler? Plus試劑盒采用與廣泛使用的Identifiler?試劑盒相同的引物，利用新一代PCR擴增技術來獲得全新水平的性能、數(shù)據(jù)質量和效率。這幫助法醫(yī)分析人員更有信心地從富有挑戰(zhàn)性的樣品中得到更多信息。

提高對含抑制劑樣本的分析性能I d e n t i f i l e r ? P l u s 試劑盒對近期AmpFlSTR? 試劑盒（如MiniFiler?試劑盒）開發(fā)時所定的緩沖液配方進行了改進，目的是克服高水平的PCR抑制，并確保更穩(wěn)定更高效的擴增。新的配方能從目前Identifiler?試劑盒無法分析的樣本中獲得結果（圖1）。靈敏度更高Identifiler? Plus試劑盒中的緩沖液和預混合液的改良可促進更穩(wěn)定的擴增 —— 即使是那些不含PCR抑制劑的樣品也一樣。在無需增加PCR循環(huán)數(shù)或進樣次數(shù)的情況下，經過Identifiler? Plus試劑盒擴增的純化樣品所產生的峰高比用目前的Identifiler?試劑盒提高了40-100%（圖2）。此外，兩種不同循環(huán)數(shù)的步驟（28和29）的驗證讓實驗室可以調整適應常規(guī)DNA模板量樣本和微量DNA樣本。改善對混合物的分析性能Identifiler? Plus試劑盒的性能改善大大簡化了對混合物案件樣品的分析 —— 這些混合物中常含有PCR抑制劑，其中次要成分可能以極低的水平存在。Identifiler? Plus試劑盒具有更高的靈敏度，更好的克服PCR抑制的能力，同時雜合子的峰高均衡性和熒光顏色之間的平衡性也更好，使得分析人員能夠比以往更輕松更可靠地分析和解釋混合物樣本（圖3）。更干凈的基線Applied Biosystems對引物生產工藝進行了重大改進，并將這些改進融入Identifiler?Plus試劑盒中。這些改進生產出更純的引物，減少染料峰的產生，從而有助于得到更干凈的基線。這個特征讓分析人員能夠用最大的自信和效率來闡釋結果，包括那些從困難混合物中獲得的結果。其它改進和優(yōu)勢試劑盒配方的改進還實現(xiàn)了更快速的擴增 —— 與目前的Identifiler?試劑盒相比，擴增步驟大約可節(jié)省1個小時。此外，Identifiler? Plus預混合液中含有AmpliTaqGold? DNA聚合酶，從試劑盒包裝上節(jié)省了2支試劑管和一個多余的包裝小盒，簡化了反應制備。Identifiler? Plus試劑盒中所包含的配方改進，均不需要對原Identifiler?試劑盒的等位基因ladder或5種染料配置進行修改。這種配置可實現(xiàn)最佳的基因座間隔，且擴增子的大小范圍不超過360 bp，與其他擴增子大小范圍明顯大得多的多重分析系統(tǒng)相比，能夠從降解的樣品中更好地獲得數(shù)據(jù)。對于嚴重降解的樣品，可采用專門設計的MiniFiler?試劑盒與Identifiler?Plus試劑盒聯(lián)合使用，利用miniSTR技術來幫助得到更多信息。此外，Identifiler? Plus試劑盒維持了原引物序列，確保與過去用Identifiler?、Identifiler? Direct、Profiler Plus?、Cofiler?或SGM Plus?試劑盒分型的樣品保持基因分型一致性，并保證了與現(xiàn)有DNA數(shù)據(jù)庫

進行比對。